0
Поскольку ЭДС является энтерическим заболеванием, образцы фекалий клинических свиней считаются «золотым стандартом» при вирусных исследованиях. В то же время, проведение мониторинга наличия и циркуляции вируса по этому образцу в неклиническом поголовье затруднено. В наши дни анализ образцов слюны признается экономически эффективным способом выявления присутствия различных патогенов, в частности, РРССВ и вируса свиного гриппа. Целью данного исследования было экспериментально оценить применимость анализов образцов ротовой жидкости для мониторинга распространения вирусов в сравнении с анализами образцов фекалий.
Стадо из 96 четырехнедельных поросят, ранее не имевших контакта с ЭДСВ и негативных на антитела к вирусам ТГЭ и РРСС, было разбито случайным образом на контрольную (n=40) и экспериментальную (n=56) группы. Группы содержались раздельно и кормились вволю. Поросята экспериментальной группы были случайным образом размещены в 4-х станках, а поросята контрольной группы – в 2-х. Животные были перорально инокулированы 1 мл изолята ЭДСВ (US/Iowa/18984/2013) 4,1 х 103 PFU/ml (БОЕ/мл). В контрольной группе заражение поросят было имитировано дачей 1 мл питательной среды для выращивания культур клеток. Сбор образцов (ректальный мазок – от каждого поросенка, слюны – объединенный для станка) происходил: первую неделю – ежесуточно; после этого и вплоть до 56-го дня после инокуляции (ДПИ) – дважды в неделю. Кроме этого, периодически производились вскрытия и собиралась сыворотка крови. Все образцы слюны и ректальные мазки исследовались на наличие полинуклеотида ЭДСВ методом ОТ-ПЦР5 в реальном времени и результаты сравнивались на предмет корреляции.
Клиническая диарея развилась у зараженных поросят через 3-5 дней после инокуляции (ДПИ) и исчезла к 10 ДПИ. О наличии у поросят вирусной инфекции свидетельствовали наблюдаемые макро- и микропатологические изменения и положительное на ЭДСВ окрашивание при иммуногистохимическом исследовании их кишечной ткани. Согласно результатам ПЦР-анализа как ректальных мазков, так и слюны, вирусовыделение началось в 1 день и достигло своего пика на 3-4 ДПИ. Хотя все клинические симптомы вирусной инфекции исчезли через 10 ДПИ, вирусный полинуклеотид продолжал определяться в слюне и ректальных мазках в концентрациях, близких к нижней границе распознавания, с 10 до 35 ДПИ. Легкий рост выделения вируса в слюну был отмечен с 14 по 17 ДПИ, хотя для ректальных мазков такой рост в общем не был характерен. Никаких полинуклеотидов ЭДСВ не было замечено ни в образцах слюны, ни в ректальных мазках, собранных в день инокуляции и ни в одном за все время из образцов контрольной группы.
В этом исследовании производился отбор образцов ротовой жидкости (в дополнение к ректальным мазкам) у животных, инокулированных ЭДСВ, чтобы в течение 7 недель провести мониторинг выделения вируса. Сюрпризом оказалось открытие того, что выделение вируса продолжается в течение почти 30 дней после исчезновения клинических симптомов инфицирования ЭДСВ. Эта информация крайне важна для производителей, которые практикуют перемещение клинически здоровых животных к поголовью, ранее подвергавшемуся заражению ЭДСВ.
Результаты ПЦР-исследований ректальных мазков и образцов слюны поросят экспериментальной группы показали заметную корреляцию как значений продолжительности вирусовыделения, так и значений его относительной количественной оценки в различные промежутки времени. Стало быть, образцы ротовых жидкостей могут быть использованы для точного определения присутствия и циркуляции ЭДСВ в стадах свиней. И хотя они недостаточно информативны для сравнения отдельных животных в группе, эти пробы позволяют точно выявить присутствие ЭДСВ при контроле статуса здоровья поголовья.
Leslie Bower, Darin Madson, Hai Hoang, Dong Sun, Luis Gimenez-Lirola, Drew Magstadt, Paulo Arruda, Bailey Wilberts, Kyoungjin Yoon. Utility of oral fluid sampling and testing for monitoring PEDV in herds. 2014 AASV Annual Meeting.