Читайте эту статью в:

Определение характеристик полевых изолятов Haemophilus parasuis от больных свиней с помощью серотипирующей ПЦР

Более 50% всех системных проб, протестированных в Ветеринарно-диагностической Лаборатории Университета штата Айова (ISU VDL) на HPS методом ПЦР, оказались положительными.

Haemophilus parasuis (HPS) продолжает создавать проблемы свинопроизводителям, являясь причиной фибринозного полисерозита, менингита и артрита, синдрома, известного как болезнь Глессера. Она считается одной из самых распространенных бактериальных инфекций на доращивании и регулярное применение лекарственных средств для борьбы с этим заболеванием – новая головная боль свиноводов. По факту, более 50% всех системных проб, протестированных в Ветеринарно-диагностической Лаборатории Университета штата Айова (ISU VDL) на HPS методом ПЦР, оказались положительными (Рис.1).

Рисунок 1. Выявление H. parasuis помощью ПЦР в системных пробах, полученных в 2013-2017 г.г. База данных ISU, 2018

Рисунок 1. Выявление H. parasuis помощью ПЦР в системных пробах, полученных в 2013-2017 г.г. База данных ISU, 2018

Если говорить о вакцинации, инактивированные цельноклеточные вакцины показали, что они, в общем случае, обладают защитными свойствами лишь против того же самого серотипа. HPS же – патоген весьма многоликий, и с помощью реакции преципитации в агаровом геле (AGPT) и непрямой гемогглютинации (IHA) уже было иписано 15 его серотипов (Turni и Balckall, 2005). Упомянутые методы серотипирования основаны на реакциях между поверхностными антигенами, например, капсульными полисахаридами и иммунной сывороткой (антисерумом). Хотя традиционное серотипирование остается самым частоиспользуемым методом изучения характеристик HPS, значительное число изолятов являются нетипируемыми.

Дальнейшее развитие молекулярных методов привело к разработке мультиплексного ПЦР-серотипирования (Howell et al., 2015; Lacouture et al., 2017). При этой реакции используются особые праймеры, реагирующие на серотип-специфичные вариации на капсульных локусах и способные распознать 14 из 15 серотипов HPS. Способность надежно дифференцировать серотип 5 от серотипа 12 не подтвердил ни один капсульно-полисахаридный ген. В 2017 г. Джиа (Jia) с коллегами предложили новую, специфичную к серотипам HPS, схему ПЦР, предполагающую использование праймеров, дифференцирующих серотип 5 от серотипа 12. Как бы то ни было, в основе праймера для серотипа 12 лежит гипотетический ген, а стало быть, дальнейших исследований не избежать.

Сравнение серотипирующей ПЦР и IHA продемонстрировало, что оба метода показали одинаковый результат для 88% изолятов, протестированых на HPS. Наблюдаемая разница может быть объяснена сложностью метода IHA. Наиболее поразительное отличие в том, что количество нетипируемых штаммов (штаммов, которые не могут быть серотипированы применением антисерума) значительно сократилось (Howell и др., 2015; Lacouture и др., 2017). Серотипирующая ПЦР была оптимизирована и теперь она предлагается ISU VDL.

По результатам анализа направленного в ISU VDL набора из 216 штаммов HPS, выделенных из взятых у свиней проб, только три изолята (0,5%) оказались нетипируемыми серотипирующей ПЦР, а это значительно меньше, чем при использовании обычных методов (15% - 41%). Наиболее часто идентифицируемыми были серотипы: 4 (24%), 7 (26,7%), 1 (14,8%) 2 (13,4%), 5/12 (13%) и 13 (10,2%). За ними шли серотипы 14 (5,6%) и 6 (0,9%) (Рис.2). Данные серотипы также обычно выявляются на реальном производстве в США, Канаде, Европе и Китае.

Рисунок 2: Дистрибуция серотипов Haemophilus parasuis в респираторных и системных изолятах, исследованных с помощью серитипирующей ПЦР

Рисунок 2: Дистрибуция серотипов Haemophilus parasuis в респираторных и системных изолятах, исследованных с помощью серитипирующей ПЦР

Большая часть изолятов из этой коллекции была выделена у свиней, больных пневмонией и полисерозитом. Основным местом локализации изолятов HPS были легкие (Рис.2), за ними шли такие системные очаги, как: перикард (21%), плевра (7%), сустав (5%), мозговая оболочка (менинг) (3,7%), брюшина (1,4%) и фибрин (0,5%). Это служит веским основанием предположить, что данные изоляты являлись вирулентными, в силу своей способности сопротивляться гибели от сыворотки и фагоцитозу – два общеизвестных вирулентных механизма при HPS (Cerda-Cuellar и Aragon, 2008; Olvera и др., 2009). Из системных очагов были выделены даже серотипы 6 и 7, ранее, согласно схеме Kielstein-Rapp-Grabrielson считавшиеся невирулентными (Kielstein и Rapp-Gabrielson, 1992). HPS может выделяться из легких здоровых свиней, и обычным делом являются коинфекции. Поэтому, всегда следует учитывать присутствие у животного других заражающих его потенциально вирулентных штаммов.

Был проведен раздельный анализ ста двадцати трех изолятов HPS, полученных с шести различных свиноводческих производственных систем США, с тем, чтобы оценить частоту серотипов на этих производствах. Серотипы продемонстрировали высокую вариабельность, в частности, потому что каждая производственная система состояла из нескольких различных ферм. Тем не менее, в большинстве случаев в каждом из потоков преобладал только какой-то один серотип. Также, мы обнаружили, что серотипы 4 (23,5%, 29/123) и 7 (22,7%, 28/123) присутствовали во всех системах (Рис.3).

Рисунок 3: Дистрибуция Haemophilus parasuis в шести самостоятельных свиноводческих производственных системах

Рисунок 3: Дистрибуция Haemophilus parasuis в шести самостоятельных свиноводческих производственных системах

Борьба с HPS требует комплексного подхода. Первый шаг – изучить характеристики изолята, обнаруженного у заболевших свиней. Мониторинг присутствия серотипов HPS в поголовье важен для сохранения контроля над болезнью. Серотипирующая ПЦР и мультиплексная ПЦР на вирулентно-ассоциированные аутотранспортеры (VtaA PCR) могут служить полезным инструментом, особенно в таких вещах, как: селекция вирулентных серотипов для включения их в аутогенные вакцины; улучшение менеджмента потока животных путем группирования и объединения источников с одним и тем же серотипом; и недопущения попадания свиней-носителей потенциально вирулентных штаммов HPS в «чистые» поголовья.

Смотреть больше статей, связанных с этой статьей

Комментарии к статье

Эта область не предназначена для консультаций авторов по поводу своих статей, это место для открытых дискуссий между пользователями pig333.ru
Оставьте новый Комментарий

Ограниченный доступ пользователям 333. Чтобы отправить комментарий, Вам необходимо авторизироваться

Незарегистрированный пользователь 333?регистрацияи доступ к ценам, поисковая система, ...
Это быстро и бесплатно
Вы зарегистрированы в 333?ЛОГИНЕсли Вы забыли свой пароль, мы вышлем Вам сюда

tags