0
Этот случай с бластоцистами у свиней, в который была вовлечена Университетская клиника для свиней, чтобы дать консультацию, произошёл в марте 2015 года на животноводческой ферме, занятой выведением поросят, в Австрии. На этой ферме поросят получают от 60 свиноматок с 3 - недельным интервалом между групповыми опоросами, с 28 - дневным подсосным периодом в закрытой производственной системе. Свиноматки регулярно вакцинируются против парвовироза и рожи, поросята – против ЦВС - 2 и микоплазмы гиопневмонии. Информация относительно других заболеваний свиней не была доступна.
Симптомы
Ответственный ветеринар сообщил о поросятах, страдающих от диареи после отъёма с последующим снижением веса. Другие клинические симптомы не могли быть обнаружены. Смертность была низкой, на уровне меньше 5%. Отдельные терапевтические меры, такие как антимикробная терапия и адаптация питания (снижение сырого белка с 18% до 15% и увеличение сырой клетчатки с 3% до 4%) не привели к выздоровлению поросят. На данном этапе нам дали совет выполнить в дополнение к этому диагностику, чтобы найти причину диареи.
Клиническое обследование и дальнейшие диагностические шаги
Один поросёнок, которого лечили колистином (5 мг/кг массы тела/сут в течение 7 дней), с типичным обильным поносом был отправлен в Университетскую клинику для свиней. Результаты клинического обследования показали умеренно пониженный пищевой статус и только диарею. После клинического обследования поросёнок был подвергнут эвтаназии для проведения вскрытия и патогистологического исследования. Для бактериологического исследования был отдельно использован участок тощей кишки. Диарейные фекалии были собраны в пробирку (заполненную полностью, чтобы обеспечить анаэробные условия) и сразу же были переданы в Институт бактериологии для выделения культуры брахиспир. Чтобы исключить ЦВС - 2, связанный с воспалением тонких кишок, фиксированные в формалине образцы ткани кишечника были гибридизированы в указанном растворе для выявления ЦВС - 2 непосредственно в кишечнике. Соскобы слизистой оболочки подвздошной кишки и толстой кишки были исследованы на наличие Lawsonia intracellularis, Brachyspira hyodysenteriae и Brachyspira pilosicoli помощью ПЦР в формате триплекс. Люминесцентная микроскопия и традиционная световая микроскопия кала проводились для обнаружения ооцист отряда кокцидий и простейших микроорганизмов.
Результаты патологического исследования
Заметные патоморфологические изменения не были обнаружены в органах. Содержимое толстой кишки было светло - зелёного цвета и жидким. При патогистологическом исследовании в слизистой оболочке тонкой кишки наблюдались несколько эозинофильных гранулоцитов (рис. 1). Цитологическая гибридизация ЦВС - 2, также как и ПЦР в формате триплекс для выявления L.intracellularis, В. hyodysenteriae и В. pilosicoli дали отрицательный результат.
Рис. 1: Гистологическое сечение тонкой кишки. В слизистой оболочке находятся несколько эозинофильных гранулоцитов.
Результаты бактериологического исследования
В тощей кишке были найдены только небольшое количество дрожжеподобных грибков и кишечная палочка. Из - за низкой скорости обнаружения кишечной палочки в тощей кишке, клиническая значимость интерпретировалась как низкая, и поэтому факторы вирулентности не были определены. Кроме того, представители брахиспир не поддавались обнаружению в специфической совокупности культур микроорганизмов.
Результаты паразитологического исследования
Ооцисты отряда кокцидий не были обнаружены путём использования люминесцентной микроскопии. В толстой кишке поросёнка были обнаружены цисты новых балантидий коли в количестве, которое рассматривается физиологическим.
При традиционной световой микроскопии были найдены мириады круглых структур в размере 10 - 20 мкм в фекалиях этого поросенка. Эти структуры выглядели прозрачными при отсутствии или почти при отсутствии «внутриклеточных» соединений (рис. 2).
Рис. 2: Фекальный мазок, окрашенный красителем Дифф-Квик. Красные стрелки указывают на стадии бластоцист.
Для дальнейшего рассмотрения этих структур был подготовлен фекальный мазок и окрашен с помощью обычного красителя Дифф - Квик из набора для окрашивания. При 1000 - кратном увеличении, используемом в световой микроскопии с иммерсионным маслом, структуры выглядели как одноклеточные, преимущественно базофильные структуры. Вследствие того, что, как нам известно, такие структуры, обычно не обнаруживаются в таком количестве в фекалиях свиней, это было представлено как что - то «новое». После консультаций с патологоанатомами, бактериологами и паразитологами мы получили окончательный диагноз от протистолога, работающего с простейшими микроорганизмами как животных, так и человека. Он определил эти структуры, как вид бластоцист.
Интерпретация полученных результатов
В связи с тем, что ни один известный кишечный патоген не был найден в клинически значимых количествах, роль общего заражения бластоцистами представилась значимой в этом случае.
Бластоцисты – это простейшие микроорганизмы, которые часто встречается у людей и животных, таких как свиньи и крупный рогатый скот. Клетка окружена клеточной мембраной и в основном состоит из большой центральной вакуоли. Ядро располагается с краю (рис. 3). Их первое описание было сделано в 1911 году, но патогенез и патогенность бластоцист ещё не полностью изучены. Физиологически бластоцисты могут быть найдены в умеренных количествах в толстой кишке свиней. Исследования, изучающие бластоцистоз у свиней при иммуносупрессии, дали основание предположить по всей вероятности колонизацию не только толстой кишки (рис. 4), но и тонкой кишки. Поражения и эпителиальная колонизация ткани кишечника наблюдаются редко и у людей, и у свиней.
Рис. 3: Фекальный мазок, окрашенный красителем Дифф-Квик. Красная стрелка указывает на центральную вакуоль. Чёрная стрелка указывает на ядро
Рис. 4: Гистологический срез толстой кишки. Красные стрелки указывают на стадии бластоцист в полости кишечника.
Предполагается, что из - за отравления мироксинами иммуносупрессия в данном случае является причиной массовой колонизации кишечника поросят. В 2014 году зерно было существенно заражено микотоксинами, особенно такими токсинами, как трихотецины А и В, по всей Центральной Европе. Дезоксиниваленол (ДОН), принадлежащий к трихотецинам группы B, и Т2 - токсин, принадлежащий к трихотеценам группы А, являются митоксинами, известными своим иммунодепрессивным действием. Из - за высокой контаминации микотоксинами зерна в целом, было решено полностью запретить зерно в кормах. Однако мы считаем, что микотоксины (особенно T2 и ДОН) были причиной иммуносупрессивных соединений, которые поддерживают и развивают колонизацию кишечника бластоцистами у предыдущих партий свиней. Этот факт наряду с отсутствием надлежащих гигиенических и дезинфицирующих процедур мог привести к чрезвычайной контаминации скотных дворов инфекционными стадиями развития бластоцист, что сказывалось раз за разом на последующих партиях.
Профилактика и лечение
Лечение бластоцистоза затруднительно из - за ограниченного количества доступных эффективных веществ для борьбы с ними. Метронидазол мог бы быть предпочтительным средством номер один, но его использование для выращивания животных, которых содержат для получения продуктов питания, больше не лицензируется и не разрешено в ЕС. Другие имидазолы, такие как тинидазол и кетоконазол, также не лицензируется и не разрешаются.
Единственным легальным способом лечения бластоцистоза является пероральное использование триметоприма - сульфаниламида или паромомицина, как добавку к питьевой воде. Паромомицин является противомикробным веществом группы аминогликозидов, который соматично плохо поглощается. После потреблелия вещество остается в полости кишечника и выводится вместе с калом. В медицине человека паромомицин используется для лечения бластоцистоза, криптоспоридиоза, амебиаза и кожного лейшманиоза.
В данном практическом исследовании была использована комбинация триметоприма - сульфаниламида через корм для лечения диареи, но это не привело к какому-либо улучшению симптомов. Поэтому ответственный ветеринар решил использовать паромомицин в дозировке 40 мг / кг массы тела в течение 10 дней для антибактериальной терапии, так как в данном случае доступен лицензированный и зарегистрированный препарат. Фактически этот препарат также зарегистрирован для лечения энтерита, вызванного кишечной палочкой.
Антибактериальная терапия бластоцист не приведёт к успеху как единственная мера. Она всегда должна быть совмещена с мероприятиями управленческого характера, такими как адекватные процедуры по очистке и дезинфекции. Так как нет доступной информации, было сделано предположение, что дезинфицирующие средства на основе креозола или четвертичных аммонийных соединений/глютаральдегида должны быть эффективными. Любой другой иммуносупрессивный инфекционный агент должен быть рассмотрен и проработан, если это необходимо. Если микотоксины подозреваются в способности вызывать болезнь, то может быть реализовано использование эффективных кормовых добавок.
Последующее отслеживание ситуации
Через несколько месяцев клиническая ситуация в хозяйстве значительно улучшилась. Паромомицин был успешно использован в трёх партиях. Диарея уже больше не наблюдалась в партиях животных, подвергнутых лечению паромомицином, и уровень смертности снизился до менее 1%. Однако, так как лечение поросят-отъёмышей паромомицином стоит дорого, ответственный ветеринар остановил противомикробную метафилактику против бластоцист и стал добавлять оксид цинка в корм (2500 мг/кг), а также древесный уголь для поддержки пострадавших животных. В настоящее время этой добавки достаточно, чтобы предотвратить диарею у поросят - отъёмышей.
Резюме и прогнозы
В заключение можно сказать, что бластоцисты должны быть добавлены к списку при постановке дифференциального диагноза в случаях диареи у свиней, особенно в годы, когда зерновые и урожай сильно заражены микотоксинами, известными своим иммунодепрессивным действием. В будущем лаборатории должны расширить своё диагностическое поле и определять бластоцисты в кале у свиней с обильным поносом.
