Новые инструменты для мониторинга вируса РРСС: когда использовать каждый из них

Во многих странах увеличивается количество ферм с племенным поголовьем, эндемично зараженным новыми вариантами вируса РРСС дикого типа. На ранних стадиях вспышек вируса РРСС воздействие на производство видно на всем пути от племенного поголовья до откорма. Однако по мере формирования коллективного иммунитета инфекция в племенном поголовье становится минимальной или субклинической. Клинические признаки на этой стадии более очевидны при взрослении, особенно ближе к концу доращивания, когда материнский иммунитет ослабевает.

Тщательный мониторинг заражения вирусом РРСС имеет решающее значение для обеспечения своевременного и полного выздоровления поголовья от инфекции и клинических признаков. В ответ на эту потребность произошло множество новых разработок в системах мониторинга и контроля, включая диагностические и клинические подходы.

Диагностический мониторинг

Согласно данным SDRS, за последнее десятилетие произошел фундаментальный сдвиг от использования образцов сыворотки к популяционным образцам для тестирования РНК вируса РРСС. Жидкости для полости рта являются основным типом проб, используемых у свиней на откорме для скрининга вирусной активности. В племенном поголовье наиболее часто используемыми образцами являются производственные жидкости (ПЖ), за которыми следуют жидкости ротовой полости и ткани.

Производственные жидкости (ПЖ) являются практическим образцом для проверки активности вируса РРСС в племенном поголовье при кастрации поросят. Они охватывают подсосных поросят в возрасте 2–7 дней, причем многие фермы предоставляют одну объединенную пробу от поросят, обработанных в течение недели. Распространенным подходом является сбор ПЖ от как можно большего количества пометов и помещений, хранение образцов в холодильнике или заморозке на ферме и ежедневная отправка образцов для одного объединенного ПЦР-теста, отражающего конкретную неделю. Как только результаты теста ПЦР станут отрицательными, ветеринары могут групповые тесты, проверяя отдельные дни на повышенную чувствительность.

Как только производственные жидкости начинают давать постоянно отрицательные результаты при анализе ПЦР (т. е. 4-6 недель подряд), главный вопрос заключается в том, остается ли популяция возраста отъема отрицательной. В этой ситуации, если вирус все еще циркулирует в поголовье, распространенность, вероятно, будет очень низкой (распространенность ≤ 3%). Таким образом, необходима высокочувствительная схема мониторинга. Именно тогда на смену приходят семейные пероральные жидкости (FOF). Такие жидкости собираются с помощью подвешенной веревки таким образом, чтобы к ней имели доступ как свиноматка, так и соответствующий приплод, оставляя образцы ротовой жидкости, представляющие «семью». Сообщается, что калькуляторы размера выборки помогают людям определить количество образцов FOF и интенсивность их объединения в зависимости от размера помещения для опороса и желаемого уровня достоверности.

Еще один недавно опубликованный подход — использование жидкости из кончика языка мертвых свиней. Этот метод отбора проб, основанный на оценке риска, удобен в случае неожиданного падения значений Ct в результатах ПЦР из образцов ПЖ, сыворотки или FOF. Кроме того, когда наблюдается атипичная длительная продолжительность положительных результатов ПЦР (т. е. 40 или более недель после вспышки вируса РРСС), взятие проб кончиков языков мертворожденных поросят позволяет понять, исходит ли инфекция из племенного поголовья (т.е. вертикальная передача) или из помещения для опороса (т.е. горизонтальная передача). Доктор Айседора Мачадо и др. недавно сообщили, что вероятность обнаружения РНК вируса РРСС на кончиках языков мертворожденных свиней была аналогична или выше, чем при обработке жидкостей, сыворотки и жидкостей ротовой полости.

Кроме того, доктор «Джек» Ли Пэн сообщил о недавнем многообещающем образце под названием «соскоб миндалин и полости рта» (TOSc). Таким образом, TOSc заключается в использовании стержня для осеменения для взятия пробы из области миндалин свиноматок и сбора вязкой пробы. Его предварительные данные, сравнивающие результаты ПЦР сыворотки, соскобов миндалин и TOSc у 30 свиноматок, показали более высокую положительную реакцию у TOSc по сравнению с другими типами образцов. На момент написания этой статьи исследования проводятся, и результаты должны быть доступны в ближайшее время. Еще одним преимуществом отбора проб TOSc является то, что он не требует напряжения свиноматок, благодаря чему процесс отбора проб происходит с относительно высокой скоростью по сравнению с традиционным методом соскоба миндалин.

Таблица 1: Методы мониторинга популяционных выборок.

Клинический мониторинг

Диагностический мониторинг очень точен, обладает превосходной специфичностью и чувствительностью. Однако в большинстве поголовий он обычно не проводится ежедневно. Чтобы восполнить этот пробел и круглосуточно следить за племенным поголовьем, производители используют преимущества клинического мониторинга с использованием доступных потоков данных в облаке. Доступны алгоритмы, основанные на статистическом управлении процессами (SPC), для организации постоянного автоматического мониторинга выбранных параметров с использованием базовых показателей для конкретной фермы. Примеры включают количество абортов, количество свиноматок, лишенных корма на этапе супоросности, а также неонатальные потери (мертворождения и мумифицированные плоды). При значительном увеличении одного или нескольких из этих параметров предупреждения выдаются предварительно зарегистрированным пользователям фермы, которые могут запускать специальные диагностические тесты, чтобы определить причину отклонения.

Заключительные выводы

Такие программы, как SDRS, предоставляют ценную информацию на макроэпидемиологическом уровне. Такая информация динамична и быстро меняется во времени и пространстве. Популяционный отбор проб из популяций свиней, включая ротовую жидкость, технологические жидкости и кончики языка, позволяет практически охарактеризовать активность вируса РРСС на уровне помещения (или корпуса). Образцы TOSc, если они будут проверены, представляют собой важный шаг на пути к скринингу супоросных свиноматок на вирус РРСС. Каждый подход к выборке служит для решения конкретного вопроса. Например:

• производственные жидкости отлично подходят для скрининга вирусной активности всего поголовья
• жидкости для ротовой полости членов семьи предназначены для проверки активности вируса РРСС у поросят отъемного возраста.
• кончики языка vмертворожденных свиней предназначены для оценки вертикальной передачи

В дополнение к инструментам диагностического мониторинга, производители должны использовать имеющиеся клинические данные для круглосуточного наблюдения за поголовьем и, таким образом, иметь возможность раннего выявления вспышек заболеваний, что позволяет быстро реагировать и корректировать меры биологического сдерживания по мере необходимости для предотвращения дальнейшего распространения патогенов на другие популяции свиней, имеющие эпидемиологическую связь с поголовьем. В целом эти подходы к отбору проб дают производителям и соответствующим ветеринарам несколько инструментов, позволяющих понять, где находится вирус РРСС в каждом поголовье.